笔者结合分散液液微萃取技术和分光光度法，对环境水样中亚甲基蓝含量进行测定，对萃取参数进行了优化，建立了分散液液微萃取-分光光度法测定环境水样中亚甲基蓝的方法，并用于实际水样的测定，结果令人满意。本研究为快速、高效地测定亚甲基蓝的含量提供了新参考。
1 材料与方法
1.1 设备与材料
T6型新世纪紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；微量可调移液器，大成仪器有限公司；pHSJ-4F型pH计，雷磁科学仪器股份有限公司；SB4200DT型超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有限公司；EL104型电子天平，上海梅特勒-托利多有限公司；800型离心机，江苏省金坛市通济仪器厂。
亚甲基蓝、三氯甲烷、二氯甲烷、乙醇、甲醇、四氢呋喃、丙三醇、盐酸、硫酸，分析纯，成都市科龙化工试剂厂；氯苯，分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；四氯化碳，分析纯，天津市津东天正精细化学试剂厂；丙酮，分析纯，成都市科隆化学品有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 亚甲基蓝标准溶液的配制
准确称取0.005 0 g的亚甲基蓝标准品，在500 mL的容量瓶中将其用蒸馏水稀释到刻度线，摇匀，配制成质量浓度为10 mg/L的标准溶液储备液。
准确移取配制好的10 mg/L的标准亚甲基蓝储备液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.70、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.00、5.00、6.00、8.00、10.00 mL分别置于50 mL的比色管中，用超纯水稀释并定容至比色管的25 mL刻度线，摇匀，得到质量浓度分别为0.04、0.08、0.12、0.16、0.20、0.28、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60、2.00、2.40、3.20、4.00 mg/L的标准溶液系列。
1.2.2 萃取剂-分散剂混合溶液的配制
用作分散液液微萃取的萃取剂应不溶于水，对分析物有良好的萃取能力，能与分散剂形成微小液滴等性质。常用的萃取剂有氯苯、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、四氯乙烷、离子液体等。分散剂必须与样品溶液和萃取剂具有较好互溶性。目前用于分散液液微萃取中的分散剂主要有丙酮、乙腈、甲醇、乙醇等。本研究将4种萃取剂四氯化碳、氯苯、三氯甲烷、二氯甲烷与5种分散剂甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃、丙三醇均按V萃取剂:V分散剂=1:5的比例两两组合配成20种萃取剂-分散剂混合溶液。
1.2.3 分散液液微萃取-分光光度法测定亚甲基蓝
准确移取5 mL亚甲基蓝溶液，置于离心管，准确移取1.2 mL由萃取剂-分散剂组成的混合溶液，迅速注进萃取体系，混合均匀，在25 ℃下于超声波清洗机中萃取5 min形成乳浊液，在3 000 r/min的转速下离心5 min，将底部的沉淀物取出后用分散剂稀释至10 mL，混合均匀后，在波长为665 nm处测定溶液的吸光度。
本实验选择的样品1为池塘水样，采自绵阳市郊；样品2模拟水样，取0.140 0 mg亚甲基蓝标准品，用蒸馏水配制成0.140 mg/L的溶液。对样品进行分析测定。
2 结果与分析
2.1 萃取条件的优化
本实验将萃取率作为评价亚甲基蓝萃取效率高低的指标，对亚甲基蓝萃取的条件进行筛选，选出最合适的萃取条件。
2.1.1 萃取剂、分散剂种类的选择
按1.2.3中的方法进行实验，考察20种萃取剂-分散剂混合溶液对萃取率的影响。结果表明，其他条件相同时，以二氯甲烷为萃取剂，以甲醇为分散剂时，亚甲基蓝的萃取率最高，因此最佳萃取剂-分散剂为二氯甲烷-甲醇组成的溶液。
2.1.2 萃取剂与分散剂用量确定
固定二氯甲烷萃取剂的量为200 μL，分别加入0.5、0.8、0.9、1.0、1.1、1.3、1.6、2.0、2.5 mL的甲醇分散剂，按照1.2.3中的方法进行实验，结果见图 1。
图1
由图 1可知，在萃取剂二氯甲烷用量相同的条件下，改变分散剂甲醇的用量对萃取率有较大的影响，当分散剂甲醇的用量为1.1 mL时，对亚甲基蓝的萃取率最大。因此最佳的分散剂甲醇的用量为1.1 mL。
固定分散剂甲醇的用量为1.1 mL，分别加入100、150、180、200、210、220、230、250、300 μL的萃取剂二氯甲烷，按照1.2.3中的方法进行实验，结果见图 2。
图2
由图 2可知，在其他实验条件相同的情况下，改变萃取剂二氯甲烷的用量对萃取率有显著影响，当萃取剂二氯甲烷的用量为230 μL时，对亚甲基蓝的萃取率最高。因此最佳的萃取剂二氯甲烷的用量为230 μL。后面的实验均采用230 μL二氯甲烷与1.1 mL甲醇的混合溶液作为萃取剂-分散剂溶液。
2.1.3 pH的选择
按照1.2.3中的方法进行实验，在其他条件均相同的情况下，调节pH分别为3、5、7、8、9、10、11，考察pH对萃取率的影响，结果见图 3。
图3
由图 3可知，当pH=9时，对亚甲基蓝的萃取率最大。因此实验最佳pH=9。
2.1.4 萃取时间的选择
本实验方法具有高效、快速的特点，但萃取时间对萃取率仍有一定影响。按照1.2.3中的方法进行实验，在其他条件均相同的情况下，改变萃取时间分别为0、1、2、3、5、7、9 min，考察了萃取时间对亚甲基蓝萃取率的影响，结果见图 4。
图4
由图 4可知，当萃取的时间为3 min时对亚甲基蓝的萃取率达到最大。因此实验最佳萃取时间是3 min。
2.1.5 离心时间的选择
按照1.2.3中的方法进行实验，在其他条件均相同的情况下，改变离心时间分别为1、2、3、4、6、8、10 min，考察了离心时间对亚甲基蓝萃取率的影响，结果见图 5。
图5
由图 5可知，当离心时间为4 min时，亚甲基蓝的萃取率最大，因此最佳离心时间是4 min。
综上所述，实验最佳萃取条件：萃取剂-分散剂溶液为230 μL二氯甲烷+1.1 mL甲醇，pH=9，萃取时间为3 min，离心时间为4 min。
2.2 分散液液微萃取-分光光度法测定亚甲基蓝
2.2.1 标准曲线的绘制
以蒸馏水为空白，将1.2.1中稀释后的0.04~4.00 mg/L的标准亚甲基蓝标准溶液于665 nm处进行吸光度测定。以亚甲基蓝浓度为横坐标（单位mg/L），以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程为A=0.179 2×C+0.002 2，r=0.999 3。该标准曲线线性关系良好，可用作亚甲基蓝含量测定的标准曲线。
2.2.2 检出限及定量限
对100 μg/L的亚甲基蓝标准溶液连续测定11次，用11组测定值的标准偏差的3倍除以标准曲线的斜率得到检出限为8.45 μg/L，用11组测定值的标准偏差的10倍除以标准曲线的斜率得到定量限为28.15 μg/L。
2.2.3 方法精密度
按照1.2.3中的方法，在最佳条件下，对100 μg/L的亚甲基蓝进行平行萃取11次，然后测定其萃取率，得到的相对标准偏差为3.87%，表明该方法精密度良好。
2.2.4 样品含量的分析及加标回收实验
按照1.2.3中的方法，在最佳条件下，对样品1、样品2中的亚甲基蓝含量进行分析测定，同时对样品进行加标回收实验，每组各平行测定5次，取平均值。结果见表 1。
表1 分散液液微萃取-分光光度法测定亚甲基蓝
| 样品 | 目标物测定值/ （mg·L-1） | 加标0.2 mg/L | 加标0.3 mg/L | 加标0.5 mg/L | ||||||||
| 测定值/（mg·L-1） | 回收率/% | RSD | 测定值/（mg·L-1） | 回收率/% | RSD | 测定值/（mg·L-1） | 回收率/% | RSD | ||||
| 1 | 0 | 0.194 4 | 97.20 | 1.80 | 0.290 7 | 96.90 | 3.01 | 0.499 6 | 99.92 | 3.84 | ||
| 2 | 0.139 0 | 0.345 6 | 103.30 | 1.85 | 0.435 0 | 98.67 | 2.34 | 0.620 9 | 96.38 | 2.69 | ||
由表 1可知，本方法的平均回收率在96.38%~103.30%，相对标准偏差均小于3.90%，说明本方法的准确度较高，可用于环境水样中痕量亚甲基蓝的测定。
3 结论
结合分散液液微萃取技术和分光光度法，建立了测定环样水中亚甲基蓝的新方法。对萃取条件进行了优化，最佳萃取条件为：萃取剂二氯甲烷用量230 μL，分散剂甲醇用量1.1 mL，pH=9，萃取时间为3 min，离心时间为4 min。结果表明，该方法具有较好的准确度和精密度，可用于实际水样中亚甲基蓝的测定。该方法具有快速、高效、环境友好等特点，为水样中亚甲基蓝的测定提供了一种新选择。
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